产品介绍
产品介绍
Kinlogix Human Bladder Cancer Organoid Kit /Medium（人膀胱癌类器官分离培养试剂盒/培养基）是一款用于建立和维持人膀胱癌类器官的完全培养基及试剂。源自患者的癌症类器官可概括原始肿瘤的基因组和病理特征，因此对医学研究和精准医学具有很大的前景。
*分离培养试剂盒适合从临床样本、原代组织开始的全流程操作；后续的传代培养只需购买培养基即可。
类器官分离培养试剂盒
组织消化液B
货号：OG-D2
规格：1ml
数量：5支
保存：20℃，12个月，避免反复冻融
P1
货号：OG-P1
规格：5ml
数量：1支
保存：-20℃，12个月，避免反复冻融
P2
货号：OG-P2
规格：3ml
数量：1支
保存：4℃，12个月
人膀胱癌类器官培养基
货号：OG09-HC
规格：20ml
数量：5 瓶
保存：-20℃，12个月，避免反复冻融
类器官传代消化液A
货号：OG-G1
规格：50ml
数量：1瓶
保存：4℃，12个月
100um细胞筛
货号：OG-001
规格：个
数量：8个
保存：常温
红细胞裂解液
货号：OG-003
规格：10ml
数量：1支
保存：4℃，12个月
类器官构建
需额外准备的试剂及耗材
基质胶、不含Ca+、Mg+的PBS、D/F12培养基、24孔细胞培养板(非TC处理)、50ml离心管、1.5ml离心管、1ml枪头、200ul枪头、35mm细胞培养皿、巴氏吸管、眼科剪、眼科镊、冰盒。
预准备
1. 将人膀胱癌类器官培养基提前过夜解冻；
2. 将准备好的基质胶（推荐使用Corning:356231）提前放置在4℃冰箱提前过夜解冻；
3. 将5ml P1加入500ml 不含Ca+、Mg+的PBS中，配制成Buffer P1，并先放于4℃冰箱预冷；
4. 将3ml P2加入100ml中D/F12培养基，配制成Buffer P2，并先放于4℃冰箱预冷；
5. 将24孔板置于CO2培养箱中预热(5% CO2，37°C)；
6. 将冰盒装满碎冰，巴氏吸管，枪头提前放于4℃冰箱预冷。
类器官构建操作
1. 收集人膀胱癌肿瘤新鲜组织样本，马上置于组织保护液（OG-005）中，4℃保存；
2. 在35mm皿中加入冰的Buffer P1，将人膀胱癌肿瘤组织样本取出，剔除正常组织以及坏死组织，用手术剪刀或者手术刀将人膀胱癌肿瘤样本剪为1-2mm3小碎片；
3. 将组织碎片转入50 ml离心管中，让组织在重力作用下沉降 2-3分钟，去除上清，加入冰的Buffer P1清洗两遍，去除上清，用10ml Buffer P1重悬；
4. 向重悬液中加入1ml组织消化液B，用封口膜封口在37℃摇床上消化1-2h，每隔30min震荡仪上震荡混匀一次；
5. 待消化完成后，用1ml枪头上下吹打10次进一步消化组织，并使用100µm 细胞过滤器过滤，30OG离心5min，去除上清；
6. 加入5ml 红细胞裂解液，室温放置5min，30OG离心5min，去除上清；
7. 加入5ml Buffer P2重悬，30OG离心5min，去除上清；
8. 根据沉淀量加入相应体积的人膀胱癌类器官培养基与基质胶1:1.5重悬；
9. 从37℃培养箱中取出提前2h放入的24孔板，每孔加入50ul混合液，放入37℃培养箱5min后倒置凝固20min；
10. 凝固后加入500ul人膀胱癌类器官培养基到24孔板，置于细胞培养箱中进行培养，每天观察类器官生长情况，每隔1d更换培养液。
类器官传代
传代操作
1. 小心吸出孔中的类器官培养基，每孔加入1ml类器官传代消化液A，用移液枪吹散基质胶，转移到15ml离心管中；
2. 将离心管置于摇床室温孵育15min；
3. 加入10ml预冷Buffer P2重悬，30OG 4℃离心5min；
4. 去除上清，以1:2-1:5传代，加入相应体积的人膀胱癌类器官培养基与基质胶1:1.5重悬，从37℃培养箱中取出提前2h放入的24孔板，每孔加50ul混合液，放入37℃培养箱5min后倒置凝固20min ；
5. 凝固后加入500ul人膀胱癌类器官培养基到24孔板，置于细胞培养箱中进行培养，每天观察类器官生长情况，每隔1d更换培养液。
