产品介绍
产品介绍
Kinlogix Human Trophoblast (Villi) Organoid Kits（人滋养层（绒毛）类器官分离培养试剂盒）是一款用于建立和维持人滋养层（绒毛）类器官的完全培养基。源自人胎盘的滋养层类器官帮助研究人员用来研究人类妊娠期间滋养层细胞的发育、功能和病理学表现（如：人滋养层类器官可以用于探究母亲与胎儿之间的互相作用、激素分泌或病原体是如何感染胎儿，帮助研究者揭示女性孕期并发症发生的分子机理）。
*分离培养试剂盒适合从临床样本、原代组织开始的全流程操作；后续的传代培养只需购买培养基即可。
类器官分离培养试剂盒
组织消化液C
货号：OG-D3
规格：1ml
数量：5支
保存：20℃，12个月，避免反复冻融
P1
货号：OG-P1
规格：5ml
数量：1支
保存：-20℃，12个月，避免反复冻融
P2
货号：OG-P2
规格：3ml
数量：1支
保存：4℃，12个月
人滋养层（绒毛）类器官培养基
货号：OG50-HN
规格：20ml
数量：5 瓶
保存：-20℃，12个月，避免反复冻融
类器官传代消化液A
货号：OG-G1
规格：50ml
数量：1瓶
保存：4℃，12个月
100um细胞筛
货号：OG-001
规格：个
数量：8个
保存：常温
类器官构建
需额外准备的试剂及耗材
基质胶、不含Ca+、Mg+的PBS、D/F12培养基、24孔细胞培养板(非TC处理)、50ml离心管、1.5ml离心管、1ml枪头、200ul枪头、35mm细胞培养皿、巴氏吸管、眼科剪、眼科镊、冰盒。
预准备
1. 将滋养层（蜕膜）类器官培养基提前解冻；
2. 将准备好的基质胶（推荐使用Corning:356231）提前放置在4℃冰箱提前过夜解冻；
3. 将5ml P1加入500ml 不含Ca+、Mg+的PBS中，配制成Buffer P1，并先放于4℃冰箱预冷；
4. 将3ml P2加入100ml中D/F12培养基，配制成Buffer P2，并先放于4℃冰箱预冷；
5. 将24孔板置于CO2培养箱中预热(5% CO2，37°C)；
6. 将冰盒装满碎冰，巴氏吸管，枪头提前放于4℃冰箱预冷。
类器官构建操作
1. 收集胎盘（蜕膜）新鲜组织样本，马上置于组织保护液（OG-005）中，4℃保存运输到实验室。
2. 在35mm皿中加入冰的Buffer P1，将蜕膜组织样本取出，用手术剪刀或者手术刀将子蜕膜组织样本剪为1-2mm3小碎片。
3. 将组织碎片转入50ml离心管中，让组织在重力作用下沉降 2-3 分钟，去除上清，加入冰的Buffer P1清洗两遍。
4. 根据组织量加入5-10ml组织消化液C，用封口膜封口在37℃摇床上消化1-2h，每隔30min震荡仪上震荡混匀一次。
5. 待消化完成后，用1ml枪头上下吹打10次进一步消化组织，并使用100µm 细胞过滤筛过滤。
6. 去除上清，加入10ml Buffer P2重悬转移到15ml离心管中300g室温离心5min。
7. 去除上清，根据沉淀量加入滋养层（蜕膜）类器官培养基重悬，将提前解冻的基质胶与重悬液1:1混合。
8. 从37℃培养箱中取出提前2h放入的24孔板，每孔加入50ul混合液，放入37℃培养箱5min后倒置凝固20min。
9. 凝固后加入500ul滋养层（蜕膜）类器官培养基，置于细胞培养箱中进行培养，每天观察类器官生长情况，每天更换培养液。
类器官传代
传代操作
1. 小心吸出孔中的类器官培养基，每孔加入1ml类器官传代消化液A，用移液枪吹散基质胶，转移到15ml离心管中；
2. 将离心管置于摇床室温孵育15min；
3. 加入10ml预冷Buffer P2重悬，300g 4℃离心5min；
4. 去除上清，以1:2-1:5传代，加入相应体积的滋养层（蜕膜）类器官培养基与基质胶1:1重悬，从37℃培养箱中取出提前2h放入的24孔板，每孔加50ul混合液，放入37℃培养箱5min后倒置凝固20min ；
5. 凝固后加入500ul滋养层（蜕膜）类器官培养基到24孔板，置于细胞培养箱中进行培养，每天观察类器官生长情况，每天更换培养液。
